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10×RealBlot 快速轉膜液

                 10×RealBlot Rapid Transfer buffer            

● 產(chǎn)品組成：

● 產(chǎn)品簡介：

快速轉膜液使用獨特配方，能高效快速地將蛋白轉移到印跡膜（PVDF或硝纖膜）上。使用濕轉法（Tank blot）或半干轉法（Semi-dry blot）方法，能在10-40分鐘內(nèi)完成轉膜過程。

快速和環(huán)保：快速轉膜液不使用甲醇，減輕了對實驗者和環(huán)境的傷害。

兼容性好：快速轉膜液能兼容Laemmli膠，預制膠，Bis-Tris膠等多種凝膠。

轉移效率高：快速轉膜液對分子量跨度較大的蛋白也有很好的轉移效率，有效解決了大小蛋白不能在同一張膜上同時轉移的問題。

● 貯存及運輸：

  4-8℃貯存，有效期一年；常溫運輸。

● 使用說明：

轉膜前的準備：

6-10張裁好的普通濾紙或Whatman3MM濾紙；裁好的轉印膜；足夠的1×快速轉移buffer；無水甲醇（處理PVDF膜用）

一 濕轉法（Tank blot）：

1 按照下表配制1×快速轉膜液

2 將濾紙和海綿浸泡在1×快速轉膜液中，完全浸濕，平衡5分鐘。

3 PVDF膜使用前要用無水甲醇潤濕30秒，隨后浸泡在1×快速轉膜液中，完全浸濕，平衡5分鐘；NC膜無需處理，直接浸泡在轉膜緩沖液中。

4 將凝膠在超純水中浸泡漂洗2分鐘，去除膠表面的SDS；隨后將凝膠浸泡在1×快速轉膜液中。

注意：水中漂洗時間一定不能超過2分鐘，否則分子量較大的蛋白不能完全轉移。

5 按照以下順序做好轉印三明治結構：

1 負極（陰極）

2 一塊海綿

3 濾紙（3張）

4 凝膠

5 轉印膜

6濾紙（3張）

7 一塊海綿（根據(jù)三明治的厚度選擇是否使用）

8 正極（陽極）

注意：  ① 要徹底清除三明治結構中的氣泡，適當補加1×快速轉膜液保持三明治結構濕潤。

 ② 三明治結構的制作不能太緊，也不能太松。太緊和太松都會影響轉印效果。如果太緊的話，可以去除陽極一側的海綿。

6 將三明治結構放于轉移槽中，轉印槽中灌滿1×快速轉膜液。

7 濕轉推薦使用恒流轉移：

二 半干轉（Semi-dry blot）：

1 按照下表配制1×快速轉膜液：

2 將濾紙浸泡在1×快速轉膜液中，完全浸濕。

3 PVDF膜使用前要用無水甲醇潤濕30秒，浸泡在1×快速轉膜液中，完全浸濕，平衡5分鐘。NC膜無需處理，直接浸泡在轉膜緩沖液中。

4 將凝膠在超純水中浸泡漂洗2分鐘，去除膠表面的SDS；隨后將凝膠浸泡在1×快速轉膜液中。

注意：水中漂洗時間不能超過2分鐘，否則分子量較大的蛋白可能不能完全轉移。

5 按照以下順序做好轉印三明治結構：

1 負極（陰極）

2 下層濾紙（5張）

3 凝膠

4 轉印膜

5 上層濾紙（5張）

6 正極（陽極）

半干轉時，濾紙、膠、膜之間的大小，一般是下層濾紙>=膜>=膠>=上層濾紙。上下兩層的濾紙一定不能接觸；濾紙、膠、膜之間千萬不能有氣泡，接觸的濾紙和氣泡會造成短路。

6 半干轉推薦使用恒流轉移：

注：不同廠家半干轉儀器設置可能有所不同，請根據(jù)廠家說明書適當調整。

三 問題解決：

 實驗示例：