16.5% RealPAGE Tricine預(yù)制膠（通用型 U型玻璃板）
Ver.750167
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貨號(hào)
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名稱
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規(guī)格
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RTD6115-0016
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16.5% RealPAGE Tricine預(yù)制膠 通用型 U型玻璃板
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10板/盒
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● 產(chǎn)品簡介：
RealPAGE Tricine預(yù)制膠可以用來檢測2.5-40 kD的多肽大小。預(yù)制膠玻璃板尺寸10×8.2 cm，凝膠尺寸8.2×7.2 cm，凝膠厚度1.1
mm，梳子12齒，最大上樣體積30 μl，兼容伯樂電泳槽。
● 貯存、運(yùn)輸和效期：
4-8度貯存（切勿冷凍）；常溫運(yùn)輸；有效期1個(gè)月。
● 使用說明：
一. 電泳緩沖液配制：
10×Tris-Tricine-SDS緩沖液（10×TTS）配制：
將10×Tris-Tricine-SDS緩沖液粉末（Cat No：CB010P）置于一干凈的一升燒杯中，加入500 ml超純水，徹底攪拌混勻，不要調(diào)節(jié)pH，即配成500 ml 10×TTS緩沖液。
1×TTS緩沖液配制
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1×TTS配制量 500 ml
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1×TTS配制量 1000 ml
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10×TTS
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50
ml
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100
ml
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超純水
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450
ml
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900
ml
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注：10×Tris-Tricine-SDS緩沖液配方[1 M Tris; 1 M Tricine ;1% SDS; ~pH 8.3]：
Tris堿121.14g；Tricine 179.2g；SDS
10 g，用蒸餾水溶解，定容至1000 ml(不用調(diào)pH)，4-8℃貯存，使用前稀釋成1×緩沖液使用。
二. 樣品處理（變性還原樣品）：
待上樣的檢測樣品與2×Tricine多肽上樣緩沖液[Cat:TP050]等體積混合，95℃處理5分鐘后上樣。蛋白Marker一般已經(jīng)含有上樣緩沖液，根據(jù)說明書上樣（預(yù)染Marker不能加熱處理，非預(yù)染Marker上樣前一般要95℃處理5分鐘）。
三. 電泳：
3.1 拆開預(yù)制膠包裝，將預(yù)制膠安裝在合適的電泳槽中。
注：伯樂Mini III或Mini-PROTEAN
Tetra Cell，天能VE-180，六一24K系列電泳槽請(qǐng)確保密封條的安裝方向（左圖）。六一其他系列，君意東方JY-SCZ2/4，百晶BG-verMINI等電泳槽可以直接使用預(yù)制膠。不兼容Thermol系列電泳槽。
3.2 將電泳槽的內(nèi)槽加滿1×TTS緩沖液，輕柔拔出梳子，用1ml移液器將梳孔吹洗干凈，將Marker或蛋白樣品（已經(jīng)過處理）加入點(diǎn)樣孔，穩(wěn)壓電泳（表1），至藍(lán)色指示前沿至分離膠下沿位置時(shí)即可停止電泳。整個(gè)電泳過程大約需要150 min。
表1 多肽電泳條件
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電壓
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電流變化
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電泳時(shí)間
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濃縮膠
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恒壓80 V
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起始電流：30-35 mA
終止電流：25-30 mA
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~20
min
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注：等待樣品指示前沿到達(dá)分離膠上沿時(shí)，調(diào)高電壓
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分離膠
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恒壓120 V
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起始電流：40-45 mA
終止電流：15-20 mA
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~130
min
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注：恒壓條件下，電流不可調(diào)節(jié)，電流是逐漸降低的，觀察記錄電流數(shù)值。
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四. 染色：（使用FastBlue蛋白染色液 Cat:RTD6202）
4.
1 將電泳后的PAGE膠取下放入塑料容器中，加入適量染色液（以剛剛覆蓋過膠面為適），蛋白條帶含量高于1μg的，染色1-2分鐘即可見。
4.2 搖床上常溫?fù)u動(dòng)10-15分鐘，至條帶清晰可見滿足實(shí)驗(yàn)要求后停止染色。
4.3
蒸餾水漂洗凝膠，在蒸餾水中脫色搖動(dòng)10-15分鐘，至凝膠基本無藍(lán)色背景，拍照記錄結(jié)果。
五. 轉(zhuǎn)膜：
多肽轉(zhuǎn)膜選擇孔徑0.22 μm PVDF膜（用前用甲醇處理潤濕）或0.22 μm NC膜。
5.1 半干轉(zhuǎn)：
使用伯樂Trans-Blot
Turbo半干轉(zhuǎn)機(jī)器請(qǐng)選擇配套的5×RealBlot快速半干轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)膜緩沖液（貨號(hào)：RT5030）。轉(zhuǎn)膜推薦條件：一板小型凝膠（8×10 cm）恒流，1.3 A，7-10
min。
5.2 濕轉(zhuǎn)：
濕轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)膜緩沖液：25 mM
Tris,192 mM Glycine, 20% Methanol,pH~8.3；
轉(zhuǎn)膜條件：恒流200-300 mA 40-60 min
實(shí)驗(yàn)示例：
