植物總蛋白提取試劑盒（適用于模式植物）
Plant Total Protein Isolation Kit（for model plant）
● 產(chǎn)品貨號及規(guī)格
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產(chǎn)品編號
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名稱
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規(guī)格
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貯存
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RTD8102-01
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試劑A-樣本雜質(zhì)去除劑
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20 ml
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4℃
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RTD8102-02
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試劑B-植物蛋白提取緩沖液I
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15 ml
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4℃
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DT0140P-01
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1M DTT
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1 ml
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4℃(配制后-20℃)
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PC2030-03
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蛋白酶抑制劑混合物（100×,植物樣品用）
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0.2 ml
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-20℃
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PL080-01
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5×MonoClolor 蛋白上樣緩沖液(變性，還原)
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1 ml
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-20℃
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● 產(chǎn)品簡介
本產(chǎn)品用于快速提取模式植物的總蛋白，可以處理各種常見模式植物如擬南芥、小麥、煙草、玉米、水稻等植物的葉片、莖和根等。得到的蛋白可用于SDS-PAGE凝膠電泳和Western印跡分析。
該試劑盒對模式植物的幼嫩組織有更好的提取效果，衰老組織和富含多糖多酚植物的蛋白提取效果不佳。此類植物的蛋白提取可以選擇通用型植物蛋白提取試劑盒（貨號：RTD8103）。
該試劑盒含有除丙酮外的其他所有試劑，使用方便，能在2小時(shí)內(nèi)得到高純度的蛋白樣品。
每次提取使用0.7 ml試劑B-植物蛋白提取緩沖液I計(jì)算，該試劑盒可以使用20次。
● 使用方法：
實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備材料：
液氮；研缽；1.5ml離心管；丙酮；70℃水浴鍋；干浴器；冷凍離心機(jī)；制冰機(jī)；渦旋振蕩器。
I 樣品破碎：
1.
取植物樣本，在液氮條件下，用研缽充分研磨成粉末。
關(guān)鍵步驟：此步驟非常重要，樣本研磨越細(xì)越好，研磨不徹底會導(dǎo)致蛋白濃度偏低。
II 沉淀雜質(zhì)：
2.
取1.5 ml離心管，加入1
ml即用型試劑A（按照下表配制），迅速將約0.1克粉末加入其中，漩渦混勻，RT
放置5分鐘。
關(guān)鍵步驟：樣品粉末量不能超過0.1克，否則將導(dǎo)致蛋白提取得率和純度大大降低。
即用型試劑A-樣本雜質(zhì)去除劑配制
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即用型試劑A
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1個(gè)樣品
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2個(gè)樣品
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n個(gè)樣品
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試劑A-樣本雜質(zhì)去除劑
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0.5 ml
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1 ml
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n×0.5
ml
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丙酮
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0.5 ml
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1 ml
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n×0.5
ml
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1M DTT
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10 μl
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20 μl
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n×10
μl
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3.12000g4℃離心5分鐘，去除上清，保留沉淀。
注：觀察沉淀顏色，如沉淀顏色為綠色，繼續(xù)步驟4；如沉淀顏色為淺色或白色，跳過步驟4，直接進(jìn)行步驟5。
4.
沉淀中加入1 ml即用型試劑A，漩渦混勻，RT放置5分鐘，12000rpm4℃離心5分鐘。
5.
沉淀中加入1 ml 預(yù)冷的丙酮（自備，試劑盒不提供）和10
μl DTT溶液，漩渦震蕩（此時(shí)溶液狀態(tài)應(yīng)為白色懸液），徹底重懸，12000rpm4℃離心5分鐘，去除上清，收集沉淀。
6.
快甩離心數(shù)秒，殘留上清用移液器徹底吸棄，沉淀物通風(fēng)晾干1-2分鐘至沉淀干燥。
關(guān)鍵步驟：沉淀不能過分干燥，否則會影響以下步驟蛋白的溶解性。
III 蛋白提取：
7.
蛋白沉淀中加入0.7 ml 即用型試劑B（按照下表配制），漩渦震蕩，徹底重懸沉淀（此時(shí)溶液狀態(tài)為懸浮溶液）；70℃水浴1小時(shí)，間歇混勻。
即用型試劑B-植物蛋白提取緩沖液配制：
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即用型試劑B
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1個(gè)樣品
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2個(gè)樣品
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n個(gè)樣品
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試劑B-植物蛋白提取緩沖液I
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0.7 ml
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1.4 ml
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n×0.7
ml
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蛋白酶抑制劑混合物（100×）
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7 μl
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14 μl
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n×7
μl
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1M
DTT
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7 μl
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14 μl
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n×7
μl
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8.12000g4℃離心10分鐘，小心取上清（通?？扇?00
μl）于1.5ml離心管中，不要吸取沉淀。
9.
蛋白樣品-20℃貯存或進(jìn)行下游電泳及Western
Blot等實(shí)驗(yàn)。
注： ① 如要濃縮蛋白，可以選擇蛋白濃縮試劑盒（貨號：RTD9101）。
② 由于提取過程中使用了DTT，為了避免對蛋白濃度測定的影響，建議蛋白濃度測定使用Bradford方法（貨號：RTP7101）。