Taq plus DNA Polymerase
高效率、高保真DNA聚合酶
|
目錄號(hào)
|
濃度
|
包裝
|
|
RTS3102-02
|
5 U/μl
|
500 U （100μl）
|
|
RTS3102-03
|
5 U/μl
|
5×500 U（5×100μl）
|
● 貯存
-20℃保存一年。
● 產(chǎn)品簡(jiǎn)介
Taq
plus DNA Polymerase是由pfu DNA Polymerase和Taq DNA聚合酶按照一定的比例混合而成，具有擴(kuò)增效率高，錯(cuò)配率低的特點(diǎn)。與Taq DNA聚合酶相比，Taq
plus DNA聚合酶具有擴(kuò)增長(zhǎng)度長(zhǎng)，保真性好的優(yōu)點(diǎn)；與pfu
DNA聚合酶相比，具有擴(kuò)增速度快，反應(yīng)效率高的優(yōu)點(diǎn)。此酶具有比Taq
DNA聚合酶約3倍的PCR可信度。該酶的大多數(shù)PCR產(chǎn)物3’端帶堿基A，可以通過(guò)TA克隆法進(jìn)行克隆。
● 產(chǎn)品組成（RTS3102-02）
Taq plus DNA Polymerase（5U/μl） 100μl
10×Taq plus PCR
buffer（含Mg2＋） 1ml
● 活性定義
1單位(U)
Taq plus DNA Polymerase活力定義為在74℃、30分鐘內(nèi)，以活性化的大馬哈魚(yú)精子DNA作為模板/引物，將10
nmol脫氧核苷酸摻入到酸不溶物質(zhì)所需的酶量。
● 酶貯存緩沖液
50 mM Tris-HCl (pH 8.0);0.1
mMEDTA;1 mMDTT;50 mMKCl ;
Stabilizers; 50% glycerol
● 適用范圍
適用于要求保真性和高效率的PCR反應(yīng)，大多數(shù)情況下可以替代Taq DNA 聚合酶。
● 使用說(shuō)明：
1.
按照下表在0.2ml
PCR管中制備反應(yīng)體系：
|
成分
|
體積
|
終濃度
|
|
Template
|
0.1-1μg
|
as
you wish
|
|
Primer
1（10
μM）
|
1μl
|
200nM
|
|
Primer
2（10
μM）
|
1μl
|
200nM
|
|
10×Taq
plus PCR buffer
|
5μl
|
1×
|
|
dNTP
Mixture(10 mM)
|
1μl
|
200μM
each
|
|
Taq
plus(5 U/μl)
|
0.5-1μl
|
2.5-5U
|
|
ddH2O
|
up
to 50μl
|
-
|
2.
混勻后，離心快甩將反應(yīng)液收集到管底。
3.
PCR儀如果沒(méi)有熱蓋加熱的話，補(bǔ)加25μl礦物油。
4.
PCR儀上執(zhí)行以下程序：
三步法：
|
步驟
|
溫度
|
時(shí)間
|
循環(huán)數(shù)
|
|
初始變性
|
94℃
|
1-5 min
|
1
|
|
變性
|
94℃
|
30 sec
|
25-40*
|
|
退火
|
Tm-5℃*
|
30 sec
|
|
延伸
|
72℃
|
1 min/kb
|
|
最后延伸
|
72℃
|
5 min
|
1
|
*注： PCR 反應(yīng)條件視模板、引物等的結(jié)構(gòu)條件不同而各異。在實(shí)際操作中需根據(jù)模板、目的片段的大小、堿基序列和引物的長(zhǎng)短等具體情況，設(shè)定最佳的反應(yīng)條件（溫度、時(shí)間等）。
● 常見(jiàn)問(wèn)題：
Q1：Taq plus DNA polymerase能擴(kuò)增多長(zhǎng)片段？
A1：對(duì)簡(jiǎn)單模板（如λ噬菌體做模板），可以擴(kuò)增 kb片段；對(duì)復(fù)雜模板（如基因組DNA），可以擴(kuò)增 kb片段。
Q2：Taq plus DNA
polymerase保真性怎樣？
A2：Taq plus含有3’-5’校對(duì)活性的聚合酶，有校對(duì)功能。保真性為普通Taq酶的3倍。
Q3：使用Taq plus DNA
polymerase的擴(kuò)增產(chǎn)物是否可以進(jìn)行TA克隆？
A3：由于使用Taq plus得到的PCR產(chǎn)物大多數(shù)帶有A，可以進(jìn)行TA克隆。
Q4：Taq plus DNA
polymerase可以擴(kuò)增高GC含量片段嗎？
A6：Taq plus可以擴(kuò)增高GC含量片段，建議使用Taq plus配合2×GC buffer使用，而不建議使用10×Taq plus PCR buffer。
Taq Plus DNA Polymerase擴(kuò)增效果
M: DNA Marker III
1: Rice PEPCase 8.6kb
2: Rice PEPCase 5.2kb
3: Rice PEPCase 3.2kb
4: pCMV-Myc 3kb
5: pCMV-Myc 2kb
